Humangenetik (Fach) / Genetische Diagnostik (Lektion)
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Genetische Diagnostik
Diese Lektion wurde von Raysap erstellt.
- hochauflösende chromosomenanalyse allg - auflösung,.... ... mikroskopisch ( prophase kern) = ungerichtete analyse des gesamten genoms Auflösung = 5 - 10 Mb (millionen basen)
- FISH allg. floureszenz in situ hybridisierung mikroskopisch gezielte analyse spezifischer bereiche Auflösung 2 - 10 kb (1000 basen)
- DNA array allg molekulare chromosomen untersuchung ungerichtete untersuchung des ganzen genom Auflösung 2-100 kb kein Nachweis balancierter Veränderung
- hochauflösende chromosomenanalyse -Lymphozyten aus venösem blut - durch PHYTOHÄMAGGLUTININ zum wachszum angeregt - feststellen/ blockieren/festhalten ( arretieren) in Meta, Prometa, Prophase durch COLCEMID - zentrifugiert -in hypoton ...
- G- bänderung Dunkle Banden = G Bande = stark kondensiertes heterochrimatin, dicht gepackt , AT reich Hele Banden = R Banden = lockeres euchromatin, CG reich , kondensiertt sehr spät in prophase
- Bezeichnung chromosom Xq27.3 Chromosom X - langer arm - region 2 - bande 7 - subbande 3 p = kurzer arm q = langer arm p10 / q10 = centromer
- Metazentrisch (-----)(-----)
- submetazentrisch (---)(------)
- akrozentrisch ()(-------) () = satellitem
- chromosoms formen M M M S S S S S S S S S A A A M S S M M A A X/Y ( A)
- perizentrische inversion bruchpunkte in q und p ., also centrum auch gedreht
- parazentrische inversion nur im p oder in q . zentrum nicht betroffen
- FISH ablauf dana denaturierung - sonde für gesuchten bereicht mit markierung mit biotin - bindet an den strang - primärer antikörper mit flourochrom bindet an die markierung - weiterer sekundärer antikörper ...
- DNA Array (genau) analyse von SNP -
- PCR 30 - 35 zyklen von: denaturierung bei 90° - hybridisierung und annealen bei 50-60° = anlagerung der primer - synthese eines doppelstranges mit Tag Polymerase
- sanger sequenzierung desoxynukleotide dNTPs zur verlängerung floureszenzmarkierte ddNTPs -> blockieren Verlängerung viel fragmente mit verch längen durch elekrophorese getrennt
- Fragmentlängenanalyse nachweis von repeat expansionen
- southern blot nachweis der größe eines spezifischen genomabschnitts DNA mit restriktionsenzymen in typische größen zerteilt - durch gelelektrophorese nach größe aufgeteilt - - auf eine membran (Blotting) fixiert ...
- methylierungsanalyse Bidulfit behandlung von DNA - nicht methyliertes cytosin in uracil umgewandelt - pcr - einbau thymin statt uracil - nachweis epigenetischer veränderung + diagnose von imprintingstörungen
- MLPA multiplex ligation dependent probe amplifikation ... Verfahren zur quantifizierung vo genomischen loci nachweis größerer deletion und duplikation epas lagert sich an - wird mit ligation verbunden - fragmentanalyse
- massiv-parallel sequenzierung Fragmentierung der DNA - verknüpfung mit afaptoren - amplifikation - massiv parallele sequenzierung - bioinformatische auswertung
- Sensitivität bei welchem Prozentsatz erkrankter Patienten die jeweilige Krankheit durch die Anwendung des Tests tatsächlich erkannt wird,