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Lernfeld 6 - molekularbiologisches Arbeiten und Biochemie (Subject) / Gelelektrophorese (Lesson)
Durchführung und Grundlagen der Gelelektrophorese
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- Warum kann DNA durch Gelelektrophorese aufgetrennt werden? - an der Oberseite der Kammer befindet sich die Kathode (- Pol)- an der Unterseite der Kammer befindet sich die Anode (+ Pol)- das Gel aus Agarose liegt in einem Laufpuffer zwischen den beiden Polen- da die DNA durch die Phosphatreste negativ geladen ist, wandert sie bei Anlegen einer Spannung durch das Agarosegel zur Anode- je nach Größe der DNA und Größe der Maschen im Agarosegel wandert sie unterschielich schnell durch das Gel -> je keiner die Fragmente, umso weiter laufen sie im Gel
- Warum ist dem Ladepuffer Bromphenolbau und Glycerin beigemischt? Bromphenolnlau ist ein Farbstoff und läuft genauso wie die DNA durch das Gel, dadurch markiert er die Lauffront und man kann genau sehen, wie weit die Probe schon durch das Gel gelaufen ist Glycerin dient der ehöhung der Dichte der Probe, so wird sie bechwert und bleibt besser in den Taschen des Gels
- Wie kann die DNA im Gel nach der Gelelektrophorese sichtbar gemacht werden? durch Ethidiumbromid -> interkaliert zwischen die Basen der DNA und leuchtet orange bei einer Wellenlänge von 256 nm meist wird es vor dem Gießen des Gels in das Gelmaterial eingebracht
- Was sind Alternativen zum Ethidiumbromid bei der Gelfärbung? - Silberfärbung- Azurblau- Fast Blast- Gel Green- Sybr Green
- Wie lässt sich nach der Auftrennung die Größe der DNA bestimmen? - durch DNA-Marker- sie enthalten definierte DNA-Fragmente- wird gleichzeitig mit der Probe auf dem Gel aufgertennt- durch Vergleich der Probe mit dem Marker lässt sich die Göße bestimmen
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