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Molgen Prokaryoten (Subject) / Reverse Genetik (Lesson)
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- Welches sind die verwendbaren Phänotypen bei der reversen Genetik? - auxotrophe Mutanten - konditioal letale Mutanten - temp.-sensitive Mutanten - Resistente Mutanten - nonsense-Mutationen
- Was ist der Unterschied zwischen positiver und negativer Selektion? Erklären Sie und geben Sie auch Beispiele an für jede Art der Selektion. Welche Art der Selektion würden Sie auswählen und was würden Sie dafür machen müssen? - positiv: Mutanten haben Vorteil, ist bevorzugt. Beispielsweise durch Resistenz und Zugabe von Antibiotikum - negativ: Mutanten haben Nachteil
- Auxotrophe Mutanten? - können bestimmte Verbindungen (z.b. HIS) nicht synthetisieren und brauchen Supplemente - defektes Enzym
- konditional lethale Mutanten? - Mutation ist unter normalen Lebensbedingungen nicht nachteilig, bei verschärften jedoch letal. - wird zur Untersuchung essentieller Funktionen eingesetzt
- Welcher Nachweis erfolgte in den Luria und Delbrück Experimenten? - dient zum Nachweis spontaner, zufälliger Mutationen - Mutationen im Gen für TonB, das als Rezeptor für Phage T1 dient - in Nährlösung kultivierte, nichtresistente Bakterien werden gleichmäßig auf verschiedenen Agarplatten ausgestrichen, die T1-Phagen enthalten - nach 24-48 h wird die Anzahl resistenter Kolonien gemessen - random: hohe Varianz - adaptiv: Zahlen sollten ähnlich sein - kann auch zur Berechnung der Mutationsrate genutzt werden
- Was bedeutet Reversion? - Rückmutation
- Transition und Transversion? - Punktmutation: Purinbasen werden getauscht - Transversion: Austausch
- Erklären Sie den Unterschied „Reversion“ und „Suppression“. Was ist eine intragenische bzw. intergenische Suppression und was ist eine „nonsense supressor tRNA“? - Suppression: Zweitmutation neutralisiert die Auswirkungen der Erstmutation - nonsense supressor tRNA: Anticodon verändert, sodass diese tRNA auch bei Stopcodons Aminosäuren einbaut und Termination aufhebt
- Frameshift Mutationen: Slipped strand mispairing mechanisms - Leserasterverschiebung führt zu anderen Aminosäuren, häufig bei repititiven Sequenzen - SSM: Slipping bei DNA-Replikation
- Welche Funktion und Aufgabe hat die Uracil-N-Glycosidase bei der DNAReparatur – beschreiben Sie den Mechanismus? - durch Deaminierung kann das empfindliche Cytosin in Uracil umgewandelt werden, CG -> TA - Uracil-N-Glycosidase entfernt Uracil, DNA wird degradiert und mit Cytosin neu synthetisiert
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- Was sind missense Mutationen? - Austausch einer Base und Einbau einer falschen Aminosäure
- Was sind nonsense Mutationen? - Austausch einer Base führt zu Stopcodon
- Welche Sequenzen spielen bei Rekombinations, Tandem Dupliaktionen und Deletionsereignissen, Looping out, eine Rolle - nachschauen
- 75. Insertionsmutanten mit IS und Transposons. Was ist hier zu beachten? Revertanten – was ist hier wichtig? - möglichst zufällige Integration ins Genom - stabile Integration, keine mehrfache Transposition - positiv selektierbarer Marker - möglichst geringe Größe - effiziente Übertragung durch delivery system - Möglichkeit zur Rückklonierung
- Was ist die Voraussetzung für das Vorkommen einer „nonsense Suppressor tRNA“ in einem Bakterium und warum ist eine nonsense Suppression nicht vollständig? - Suppressor-Mutation in tRNA-Genen - andere AS wird eingebaut, da sich die tertiär-Struktur der tRNA nicht ändert - wenn es eine nonsense suppressor tRNA gibt, muss es andere tRNAS für das normale Codon geben - wobble-Regel: nonsense suppressor tRNA erkennt nonsense Codon und Originalcodon
- Was ist der Ames Test? - ein Testverfahren zur Identifikation chemischer Mutagene - auxotrophe Mutanten werden auf einen Nährboden ohne Supplement ausgestrichen und einem potentiellen Mutagen ausgesetzt. - wachsen die Kolonien trotzdem, handelt es sich um Revertanten - die Fähigkeit zur Bildung des fehlenden Supplements wurde durch Mutagenese d. eingesetzten Substanz wiedererlangt - erst in Gegenwart von Säugetierleberextrakt mutagene Wirkung
- Was sind „Siblings“? Wie kann die molekulare Analyse von Siblings (und damit eine falsche Kalkulation an Mutationsereignissen) vermieden werden? - nachfragen