Agrarbiotechnologie (Subject) / Gentechnisch produzierte Proteine (Lesson)

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• Rekombinante Proteine - mit Hilfe gentechnischveränderten Organismen hergesellt (Bakterien)
• Agrarsektor - regenerative Rohstoffe anstelle fossiler Energieträger- Verringerung des Bedarfs von Pestiziden- Widerstandfähigkeit gegen Schäden durch INsekten
• Chemikalien aus Nutzplflanzen = Entwicklung von Verfahren zur Verbesserung der Prozesse, umweltfreundlichere Produkte herzustellen
• Molecular Farming - Produktion von Arzneimitteln mit Hilfe der Landwirtschaft- besonders rekombinante Proteine als Biopharmazeutika in Pflanzen und Tieren produziert
• Vorteile rekombinanter Proteine - Können sehr gezielt im Körper an besimmte Substanzen/Zellen binden- Können somit ins Krankheitsgeschehen eingreifen
• Interaktionschromatographie - Abtragung der Hydrathülle durch hohe Salzkonzentration- Elution durch Verringerung der Salzkonzentration= ermöglicht die Trennung von Proteinen mit nativer Konformation von falsch gefalteten Proteinen
• Gelfiltration - trennt Moleküle nach ihrer Größe- ab bestimmter Größe dringt das Molekül nicht mehr durch das Trenngel- Moleküle eluieren mit der Lösungsmittelfront- kleine Moleküle dringen in Poren des Trenngels ein und eluieren verzögert
• Ionenaustauschchromatographie - Grundlage: kompetitive Wechselwirkung geladener Teilchen- Protein konkurriert mit Salzion um die geladene Position auf Ionenaustauschmatrix- Protein bindet an fixierte Ladungen der stationären Phase - das gebundene Protein wird durch steigende Salzkonzentration im Elutionspuffer verdrängt
• Affinitätschromatographie - abhängig von individuellen strukturellen und funktionalen Proteineigenschaften- Interaktion: Antigen/Antikörper                     Enzym/Substrat                      Ligand/Rezeptor- macht sich biologische Interaktionen zwischen Molekülen zunuzte
• Affinitätschromatographie - abhängig von individuellen strukturellen und funktionalen Proteineigenschaften- Interaktion: Antigen/Antikörper                     Enzym/Substrat                      Ligand/Rezeptor- macht sich biologische Interaktionen zwischen Molekülen zunuzte
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• Grundprinzip der Affinitätschomatographie - Equilibrieren- Bindung der Probe- Waschen- Elution- Regenerieren der Matrix
• Ziel der Proteinreinigung - Postulierte Aktivität isolieren- bekanntes Protein für funktionelle Studien isolieren- Therapeutisches Protein
• Extraktion von Proteinen - Ziel: gewünschtes Protein in löslischem Zustand- Gewebe wird in speziellen Puffer gegeben- Zellen müssen aufgebrochen werde- Probe zentrifugiert: löslich und unlöslich wird getrennt
• Fällung von Proteinen - grobe Vorreinigung, um Kontaminationen, die bei einer späteren Proteinanalyse stören würde, zu entfernen
• Fällung von Amoniumsulfat - Nicht denaturierendes Verfahren- geladene Amoniumionen und Sulfationen hydratisieren und entziehen dem Protein die Hydrathülle - Aggregatbildung durch hydrophobe Wechelwirkung und Protein fällt aus
• Elektrophorese (Anwendung und Trennprinzip) - Anwendung: Proteine, Peptide, AS, Nukleinsäuren....- Trennprinzip:Nach der LAdung, dem isoelektrischen Punkt und nach der Göße
• Western-Blot - Spezifische Anfärbung einer BAnde auf SDS-PAGE- Verfahren: Antikörper des nachzuweisenden Proteins ist mit Enzym gekoppelt, dieses setzt durch spezifische Reaktion enen Farbstoff frei

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