Ein Sonderfall sind Mykobakterien. Sie sind eigentlich gram+, jedoch ist ihre Zellwand durch Wachse und Lipide so modifiziert, dass Farbstoffe nur sehr schwer eindringen können. Mit einer speziellen Kontrastfärbung, der Ziehl-Neelsen-Färbung (Phenolfuchsin plus Hitze), ist der Nachweis ihrer Zellwand aber möglich. Da sie bei der anschließenden Behandlung mit Säure und Alkohol nicht wieder entfärbt werden, werden Mykobakterien auch als säurefest bezeichnet. Sie bleiben im Vergleich zu Bakterien ohne lipidhaltige Zellmembran, z.B. allen gramnegativen und zellwandlosen Bakterien, rot gefärbt.