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Lernfeld 6 - molekularbiologisches Arbeiten und Biochemie (Fach) / Proteinisolierung und -reinigung (Lektion)
Isolieung von Proteinen aus Zellen, Anreicherung und Reinigung von Proteinen
Diese Lektion wurde von FranziBio erstellt.
- Wie können Proteine aus einer Probe gewonnen werden? extrazelluläre Proteine:- Zellabtrennung- Abtrennung von unlöslichem Materialintrazelluläre Proteine:- Zellaufschluss durch: Ultraschall, Pressen der Zellen durch eine schmale Öffnung unter hohem Druck, rotierender Glaskolben in einem dickwandigen Glasröhrchen, osmolytisches Aufbrechen durch hypothone Lösemittel- Abtrennung von unlöslichem Material
- Anreicherung von Proteinen, wenn noch Nucleinsäuren, Kohlenhydrate und Lipide in der Lösung enthalten sind. 1. Abtrennung der niedermolekularen Verbindungen durch z.B. Größenausschlusschromatographie oder Dialyse2. Entfernung der Nucleinsäuren durch Anionen-Austausch-Chromatographie, Ethanol-Fällung, DNasen bzw. RNasen oder Zugabe von Protaminsulfat3. Entfernung von Polysacchariden durch Fällung der Proteine
- Durch welche Methoden können Proteine ausgefällt werden? - Denaturieung von Proteinen- Fällung mit organischen Lösemitteln (z.B. Alkohol)- Fällung am Isoelektrischen Punkt, dort ist die Löslichkeit am niedrigsten- Änderung der Salzkonzentratio- Auswahl des geeigneten Gegenions