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Bioanalytik (Fach) / Free Flow Elektrophorese (Lektion)
- Nennen Sie technische Herausforderungen bei der Analyse komplexer Proteingemische - tausende Proteinspezies mit unterschiedlichen physiko-chemischen Eigenschaften - 6-8 verschiedene Größenordnungen - liegen alle in der gleichen Lösung vor - Komplexität übersteigt Leistungsfähigkeit der MS
- Welche neuen Ansätze gibt es zur Lösung der genannten technischen Herausforderungen? - Fraktionierung der Zellen nach funktionellen Kriterien - Trennung von Isoformen - Trennung von Konformationen - Anreicherung hochverdünnter Proteine
- Was sind die Unterschiede bei der FFE ggü. normaler Gelelektrophorese? 1. kontinuierlicher Prozess 2. daher unbegrenzte Probenmenge trennbar 3. Trennung erfolgt ohne Stabilisierungsmittel 4. Analyte gehen nicht verloren 5. Elektrolyte und Probe störmen in einem Laminar Flow senkrecht zum elektrischen Feld, d.h. ist das Wanderungsprofil Resultat von 2 unabhängige Kräften.
- Welche elektrophoretischen Trennmethoden können mit der FFE durchgeführt werden? 1. Zonen-Elektrophorese und Intervall-Zonen-Elektrophorese 2. Isotachophorese 3. Isoelektrische Fokussierung 4. Feldsprung-Elektrophorese
- Nennen Sie wichtige Merkmale hinsichtlich der zu trennenden Proben bei der FFE. 1. Keine Begrenzung in Molekülgröße 2. Trennung nativ und denaturierend möglich 3. Der Probenauftrag ist an verschiedenen Stellen im elektrischen Feld möglich. 4. Die Trennung erfolgt in nur wenigen Minuten
- Was ist das Prinzip des Laminar Flow? - Parallel strömende Flüssigkeiten vermischen sich nicht! - dieses physikalische Phänomen erlaubt es, das Wanderungsprofil des Analyten ohne zusätzliches Stabilisierungsmittel einzufrieren
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