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ABT (Fach) / Anwendungen und Techniken I (Lektion)

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• Definieren Sie PCR = Polymerase Chain Reaktion (PCR) = Enzymabhängiges Verfahren zur Vervielfältigung bestimmten DNA-Sequenzen innerhalb einer vorliegenden DNA-Kette kommt bei Replikation in allen Zellen vor (mittels DNA-Polymerase) Gentechnische Verwendung zur in vitro -Amplifizierung (=in der Zelle, bspw. in E.coli)    
• Wozu dient die Elektrophorese? DNA-Analyse/ Auftrennung der DNA = Untersuchungsmethode, die auf der räumlichen Trennung geladener Moleküle, bzw. Molekülgruppen in einem elektrischen Feld basiert Gelmatrix = Elektrisches Feld Wanderung der negativ geladenen DNA (kurze Fragmente schnell, lange Fragmente langsam) Fluoreszenzfärbung
• Wo liegt der Vorteil des Southern- oder Northern Blots im Vergleich mit PCR? Im Gegensatz zu DNA-Sequenzierung ist hier KEIN AMPLIFIKATIONSSCHRITT erforderlich Nachweis erfolgt direkt an genomischer DNA (die zuvor einem Restriktionsverdau mittels Restriktionsenzyme unterzogen wurde)
• Wozu kann die, durch PCR amplifizierte DNA genutzt werden? Gentecknik -> klonierte DNA kann dann als Fremd-DNA in Vektor und schließlich in Organismus eingeführt werden oder medizinisch für Untersuchungen bereitgestellt werden oder zur Diagnostik von Infizierungen eines Organismus (auch Mensch) mit Baktieren, Viren, Pilzen .. sofern deren DNA-Sequenz bekannt ist Kriminologie
• Wodurch unterscheidet sich Southern Blot von Northern Blot? Southern Blot: mit DNA Norther Blot: mit RNA
• Was versteht man unter Klonierung von DNA? = Einführung eines DNA-Fragments (z.B. einer cDNA) in einen Vektor (z.B.Plasmid) und die darauffolgende Vervielfältigung des resultierenden Produktes durch einen Zielorganismus (z.B. E.coli)
• Wie wird klonierbare DNA (Bspw. dscDNA) in einen Vektor eingebracht? im einfachsten Fall werden DNA-Fragment und Vektor mit dem gleichen Restriktionsenzym geschnitten anschließend durch Ligase wieder zusammengefügt
• Definiere Plasmid kleine ringförmige extrachromosomale DNA-Moleküle (Nukleinsäuremolekül) können benutzt werden, um Fremd-DNA in Bakterien einzuschleusen (sind in der Lage sich als selbstständige vermehrungsfähige Einheit in einer Wirtszelle zu replizieren)w  müssen Vorteil für Bakterium haben
• Anforderungen an einen idealen Vektor soll Wirtszelle mit hoher Effizienz transformieren sich in Wirtszelle autonom replizieren in der Wirtszelle in vielen Kopien vorliegen in alle Tochterzellen weitergegeben werden nicht der Rekombination unterworfen sein Möglichst große Framd- DNA-Fragmente aufnehmen können Ein Resistenzgen haben (um gezielte Isolierung der Transformation zu erlauben)
• Was bedeutet Ligation von DNA Verbinden zweier passender DNA-Fragmente ("ligieren") mit Hilfe des Enzyms Ligase (unter ATP-Verbrauch)
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• Was versteht man unter Hochdurchsatzanalysen? Methoden, mit denen man den biomolekularen Zustand eines Organismus in seiner Gesamtheit messen kann

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