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Biochemie (Fach) / Praktikum 9 (Lektion)
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- Arylierungsreaktion Ninhydrin + AS →Ketosäure + red. Ninhydrin + NH3 Red. Ninhydrin + Ninhydrin + NH3 →rot/violetter Komplex (Prolin:gelb)
- Formoltitration AS + Formaldehyd → Methyloderivat AS + H+ Die Wasserstoffatome lassen sich durch Titration mit einer Basenlösung bekannter Konzentration nachweisen. Formaldehyd + NaOH →neutralisiertes Formaldehyd AS-Lösung + NaOH beide zusammen mit NaOH
- Kennzeichnen der AS mit 2,4 Dinitroflour-benzol AS+ 2,4 Dinitroflourbenzol → DNP-AS (Dinitrophenyl-AS) DNP-AS = gelb DNP-AS ist stabil und widersteht auch saurer Hydrolyse und ist leiht kristallisierbar Rf-Wert ist unterschedlich zu denen freier AS und ist chromatografisch nachweisbar.
- Dansylierung Dansylchlorid + AS → Dansyl-AS widersteht der sauren Hydrolyse und flouresziert chromatografisch nachweisbar, da unterschiedlicher Rf-Wert als freie AS
- Nachweis der Sulfhydrylgruppe Sulfhydrylgruppe in Cystein 2 Cystein (basisches Milieu) + Na2CO3 + Fe2(SO4)3 → Sulfidbrücke zwischen Cystein Fe3+ wird zu Fe2+ und 2H gehen verloren. Fe3+ geht mit der -SH-Gruppe des Cysteins einen lila Komplex ein, der nach der Reaktion verschwindet.
- Nachweis von Tyrosin Salpetersaures Milieu nachgewiesen wird die p-Hydroxy-phenyl-Gruppe p-OH-phenyl-Gruppe + Quecksilbersalzen aus HgNO3 →roter Komplex
- Dansylreagens 5-Dimethyl-1-naphtyl-sulfochlorid
- Nachweis von Tryphtophan Hopekins-Cole Reaktion saures Milieu: Essigsäure in der viel Glyoxylsäure gelöst ist ( durch Schwefelsäure oxidierte Essigsäure) Aldehydgruppe der Glyoxylsäure reagiert mit der Indolylgruppe des Tryphtophans zu einem violetten Komplex
- Verteilungschromatographie Prinzip: versch. AS lösen sich in versch. Lösungsmitteln unterscheidlich stark apolare laufen schneller als polare je apolarer die Moleküle desto weiter weg von der Startlinie stationäre Phase ist flüssig aber an festem Trägermaterial gebunden
- Dünnschichtchromatographie stationäre Phase: Zellulose, Silikagel, Aluminiumoxid Lösungsmittel: n-Butanol:Essigsäure:Wasser = 60:20:20 danach Ninhydrin-Reaktion
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- Ionenaustauschchromatographie Anionen- oder Kationenaustausch zwischen der AS-Lösung und einem Ladungstragenden Harz. Trägermaterial: Kunstharze -> Dowex50 man leitet NaOH über das Kunstharz Na+ Ionen werden durch die -SO3- des Dowex 50 gebunden solange bis alle -SO3- Ionen an Na+ Ionen gebunden sind Harz gerät in Na+-Phase dann leitet man eine stark saure AS-Lösung über das Harz und die AS ersetzen die Na+ Ionen nur durch eine Pufferlösung unterschiedlichen pH-Wertes oder mit Salzlösung kann man die AS abtrennen