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Agrarbiotechnologie (Fach) / Standardmethoden der Molekularbiologie (Lektion)
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- Isolierung der DNA - beginnt mit Öffnung von Zellen bzw. Virushüllen- durch enzymatischen Verdau - Isolierung der Zelkerne, Mitochondrien, Plastiden- Entfernung der Proteine- dann Lyse des Ausgangsmaterials Chloroform- Intubation mit DNA-bindender Matrix- Zentrifugation/Waschen- Elution
- Polymerase-Chain Reaction = Verveilfertigung der DNA- 1) Denaturierung bei 95 grad- 2) Hybridiesung bei 54-63 grad- 3) Polymerisierung bei 72 grad
- Agarosegel-Elektrophorese = Aufreinigung der gesuchten DNA-Fragmente zur gezielten Klonierung- Aufkochen der Agarose- Agarosegel in Kammer gießen- mit Kamm Taschen für DNA-Lösung freihalten- nach Polymeration DNA auftragen- Hochspannnung anlegen
- Isolierung von mRNA selbes Prinzip wie DNA Isolierung nur nciht mit RNase, da diese die RNA leicht abbauen- optimal: DNAsen und Proteinase
- Reztriktionsenzym Endonukleasen, die auf einem DNA-Molekül spezifische Basenfolge erkennt und schneidet
- Plasmid kleines, ringförmiges, autonom replizierendes, extrachromosomales DNA-Molekül
- Vektor Nukleinsäuremolekül: Träger fremder DNA
- Wichtige Eigenschaften eines Klonierungsvektors - Ori- Resistentgen- Multiple Cloning Site
- Ligase verbindet zwei Fragmente miteinander
- cDNA-Bibliotheken enthalten im Idealfall alle zu einem Zeitpunkt x in einer Zelle oder in einem Gewebe vorhandene mRNAs
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- Transformation von Bakterien 1) Erzeugung kompetenter Zellen2) Einschleusen der Fremd-DNA3) Selektion transformierter Bakterien