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BC-Nukleinsäuren (Fach) / PCR (Lektion)
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- Was ist PCR? 1. Methoden zur zyklischen Amplifikation (Vervielfältigung) spezifischer doppelsträngiger DNA-Abschnitte aus sehr kleinen Mengen Ausgangs-DNA=DNA-Template um den Faktor 10 hoch 6 bis 10 hoch 12 (exponentiell!)
- Wie wird es durchgeführt? 1. In vitro!
- In welche Abschnitte kann man den Ampflikationszyklus untergliedern? Temperaturen? 1. Denaturierung bei 90°C 2. Annealing=Hybridisierung bei ca. 50 - 60°C 3. Elongation=DNA-Synthese bei ca. 70°C
- Was erfolgt in der Denaturierung ? 1. Erhöhung der Temperatur auf 90°C 2. Spaltung der H-Brücken zwischen den komplementären Basen 3. Trennung der doppelsträngigen DNA in 2 Einzelstränge
- Was muss man vor der Annealing-Phase herstellen? 1. Sequenz-spezifische Primer
- Was ist folglich die Voraussetzung für die Herstellung der Primer? 1. Kenntnis über die Sequenz des zu amplifizierenden DNA-Abschnitts!
- Was passiert in der Annealing-Phase? 1. Primer binden an den jeweiligen Enden der komplementären DNA-Sequenz
- Was passiert in der Elongationsphase? Synthese der DNA: 1. Knüpfung der Desoyribonucleotide an das 3'-OH-Ende der Primer 2. Durch hitzestabile DNA-Polymerase 3. aus thermophilen Bakterien 4. wie Taq-Polymerasen aus Thermus aquaticus Folgich: Durch diesen Schritt Verlängerung des Primers um ein Desoxyribonucleotid
- Welche Desoxyribonucleotide werden für die DNA-Synthese verwendet? 1. dATP 4. dTTP 2. dGTP 3. dCTP
- Was entsteht folglich wieder dadurch? 1. Eine doppelsträngige DNA!
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- Wie viel mal wiederholt sich dieser Amplifikationsprodukts? 1. ca. 20 bis 50 Mal!
- Wo findet die PCR ihre Anwendung? 1. Bei Erstellung des genetischen Fingerabdrucks 2. Nachweis von Bakterien im Patientenmaterial bei Infektionen 3. Virusdiagnostik, Nachweis von Mutationen!