Gram+ Bakterien, die sehr dicke Zellwände aus Peptidoglycan besitzen, werden durch den Alkohol dehydriert. Dies führt dazu, dass sich die Poren in den Zellwänden schließen und der unlösliche Kristallviolett-Iod-Komplex nicht auslaufen kann.

In gramØ Bakterien dringt Alkohol sehr leicht in die lipidreiche äußere Membran, dabei verhindert die dünne Peptidoglycanschicht auch nicht den Austritt von Alkohol, so dass der Kristallviolett-Iod-Komplex leicht entfernt wird.