Biochemie für Pharmazeuten (Fach) / Harnstoffdiagnostik (Lektion)

Vorderseite CaCl2-Methode: (häufig bei Transfektion)
Rückseite

Prinzip: Wirtszelle für Aufnahme von DNA fähig machen◦ Behandlung der Wirtszellen mit 0,1 molarer CaCl2-Lösung◦ Calcium-Ionen steigert Aufnahmefähigkeit der Zellen für Fremd-DNA durch Veränderung derMembrandurchlässigkeit◦ für optimale Aufnahme der Fremd-DNA → Kälte/Wärmebehandlung◦ wenn DNA = Träger eines Resistenzgens als Marker dann:▪ zuerst Überführung in einfaches Nährmedium → gewährleistet Expression des Resistenzgens▪ Überführung in Selektivmedium

Prinzip:▪ Membran negativ geladen → Anlagerung von Ca2+ → Membran positiv geladen → Anziehung desnegativen Plasmids in die Nähe der Membran → durch Erhitzen auf 42°C Zerstörung der Membran→ Plasmid kann in die Zelle rein diffundieren → Voraussetzung: genügend vorhandenes Plasmid

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