1, TPP von der Pyruvat-Dehydrogenase greift, mittels reaktiven Carbanions, nukleophil an das Pyruvat an, wobei CO₂ abgespaltet wird und ein "aktiver Aldehyd" entsteht (Hydroxyethylthiaminderivat).

2, Die Hydroxyethylgruppe wird nun zur Acetylgruppe oxidiert und auf einen Liponamidrest (= cycl. Disulfidverbindung) der Transacetylase übertragen, wobei ein Thioester ausgebildet wird.

3, Transacetylase überträgt die Acetylgruppe auf einen zweiten Liponamidrest und erst dann auf Coenzym A, wobei Acetyl-CoA freigesetzt wird.

4, Dihydrolipoyl-Dehydrogenase regeneriert die Liponamidgruppe durch seine prosteht. Gruppe FAD. Anschließend reduziert das gebildete FADH₂ das Cosubstrat NAD⁺ zu NADH