Phänotyp:

Texel: sehr asugeprägt, Fleischschaf-Rasse, Muskelhyperplasie (mehr Muskelfasern), Romanov: unterdurchschnittlich Fleisch, Rasse bekannt für hohe Ovulationsrate (Zwillinge bis Vierlinge)

Suche nach kausaler Mutation:

1. Erzeugung einer Resourcenfamilie, 2. Kopplungsanalyse mit Mirkorastelliten → Signal bei MSTN Gen (= Myostatin Gen) → weniger Myostatin → mehr Muskelfasern

3. Sequenzierung des MSTN Gens via PCR → keine Sequenzunterschiede im kodierenden Bereich (auch nicht auf RNA), aber Einzelbasenaustausch u.a. im 3'UTR Bereich (Polymorphismen Bereich)) (nicht codierender Bereich) → A mit 99% bei T, 1% bei W

Wie entsteht Phänotyp:

AS-Sequenz des MSTN Proteins unverändert, MSTN Transkriptmenge ähnlich zwischen Texel und Romanov (nachgewiesen durch PCR, mRNA untersucht)

→ ist Translation inhibiert? → Proteinexpression untersuchen durch Immunpräzipitation aus Serum → T schwache Bande, W starke Bande → erklärt Phänotyp

miRNA:

jeder Säuger hat ca. 100 Gene für mikroRNA → 1. werden transkribiert, Cap und PolyA wie normale mRNA aber mit Sekundärstruktur (1 Strang bindet mit sich selber) = pri-miRNA

2. RNAse schneidet Ränder ab → nur Sekundärstruktur bleibt = pre-miRNA (70 nt), 3. Export aus Kern ins Zytoplasma, 4. Nuklease schneidet Schleife durch und baut einen Strang ab = mature miRNA (22 nt) → 1 einzelsträngige RNA = RISC (RNA- induced silencing complex) → kann andere mRNA hemmen

miRNA kann mRNA hemmen bei mind. 8 Basenpaare-Match am 5'-Ende → Ribosom kann nicht binden → keine Proteien/kein Myostatin

beim Texel gibt es nach Mutation ein A statt ein G → 8 Matches, beim WIldtyp kann das normale G nicht ans Uracil binden → kein totaler Match → Myostatin-mRNA nicht gehemmt

Kontrolle:

via Reporter-Gen Experiment = 1 Gen dessen Aktivität leicht messbar ist → Luc-Gen vom Glühwurm (sorgt für Licht) → daran wird der vermehrte Bereich gehängt in dem Mutation geschah → durch das Leuchen kann auch die Aktivität des Myostatin gemessen werden → verminder bei Texel wenn auch miRNA begegeben wird

+ Kontrolle, dass gewisse miRNA auch wirklich im Skelettmuskel exprimiert wird